一、实验目的

本研究利用固相萃取作为样品前处理方法,HPLC作为分析方法,检测蜂蜜样品中四环素类抗生素的残留水平。该方法操作简便,可简化样品前处理过程,减少有机溶剂的使用。

二、实验目标物

土霉素(CAS:79-57-2),四环素(CAS: 60-54-8)。

三、应用范围

本方法适用于蜂蜜中四环素类的固相萃取及HPLC检测与确证。

四、参考标准

《GB/T 21317-2007 食品安全国家标准 动物源性食品中四环素类药物残留量检测方法 液相色谱-质谱/质谱法与高效液相色谱法》。

五、实验材料

biocomma? Copure? HLB固相萃取柱60 mg/3mL(Cat.No.COHLB360)。

六、实验方法

1、样品提取称取混匀蜂蜜试样5 g(精确到0.01 g),置于50 mL离心管中,用0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine 缓冲液溶解并定容至50 mL,漩涡混合1 min,冰水浴超声10 min,转移至50 mL离心管中,冷却至0 ℃-4 ℃,5000 r/min离心10 min(温度低于15 ℃),用中速滤纸过滤待净化。2、SPE柱净化(1)活化:HLB柱依次用5 mL甲醇和5 mL水活化。 (2)上样和洗脱:准确吸取10 mL备用液以1滴/秒的速度过HLB固相萃取柱,待样液全部流出后,依次用5 mL水和5 mL甲醇-水(5:95, v/v)淋洗,弃去全部流出液。2.0 kPa以下减压抽干5 min,最后用10 mL甲醇-乙酸乙酯溶液(1:9, v/v)洗脱,收集洗脱液。 (3)重新溶解:洗脱液于40 ℃氮气吹干,加10 mmol/L三氟乙酸水溶液1.0 mL溶解残余物,滤膜过滤,供高效液相色谱测定。3、HPLC条件设备:Waters Alliance 2695色谱柱:Welch Ultimate XB-C18 (4.6X250 mm)检测器:Waters 2487 紫外检测器检测波长:350 nm流动相:A: 乙腈 B:10 mmol/L三氟乙酸水溶液 洗脱方式:梯度洗脱 表1 梯度洗脱条件流速:1 mL/min 柱温:室温 进样体积:20 μL

七、实验结果

1、蜂蜜基质中添加1 mg/kg四环素的回收结果表2 蜂蜜基质中添加1 mg/kg四环素的回收结果2、添加水平为1 mg/kg蜂蜜中四环素检测色谱图图1 添加水平为1 mg/kg蜂蜜中四环素检测色谱图 结论:蜂蜜中四环素类药物残留检测的平均回收率大于85%,RSD小于1.9%。